近年來,食用菌病害甚多,至今尚無有效、專用的防治藥物應用于生產。將植物的脫毒技術應用于食用菌生產,可有效抑制病害的發生。
所謂植物脫毒(du)(du),是(shi)將植物莖尖生長(chang)尖端(duan)組織(zhi)進行分(fen)離,將分(fen)離組織(zhi)置于特定培(pei)養基中進行培(pei)養,從而獲(huo)得脫離原體(ti)病(bing)毒(du)(du)、病(bing)菌(jun)的(de)新(xin)生種(zhong)苗。具體(ti)到食用菌(jun)的(de)脫毒(du)(du)繁(fan)種(zhong),嚴格說來,一般的(de)組織(zhi)分(fen)離并不能達到使菌(jun)種(zhong)脫毒(du)(du)的(de)目(mu)的(de),這(zhe)是(shi)由于子實(shi)體(ti)已生長(chang)至中后(hou)期,攜帶(dai)病(bing)毒(du)(du)、病(bing)菌(jun)的(de)概率相當高,故脫毒(du)(du)效(xiao)果不明顯。而將食用菌(jun)尖端(duan)生長(chang)點進行脫毒(du)(du),效(xiao)果理(li)想。
具體的(de)脫毒方(fang)法有兩(liang)種:
1.菌絲(si)尖端脫(tuo)毒技術
使用(yong)規(gui)(gui)(gui)格為(wei)90毫(hao)(hao)(hao)米(mi)或(huo)110毫(hao)(hao)(hao)米(mi)的培(pei)養(yang)皿(min)。無此(ci)規(gui)(gui)(gui)格培(pei)養(yang)皿(min)時,也可改用(yong)規(gui)(gui)(gui)格為(wei)25毫(hao)(hao)(hao)米(mi)×200毫(hao)(hao)(hao)米(mi)的大型(xing)試管,但操作不太方便。 先(xian)按(an)常規(gui)(gui)(gui)制備(bei)母種(zhong)培(pei)養(yang)基,裝入(ru)三角瓶,棉塞封口,加皮(pi)紙包封;同時將(jiang)培(pei)養(yang)皿(min)洗凈(jing)后(hou)用(yong)牛(niu)皮(pi)紙包好。二者(zhe)同時進行滅菌(jun)處理。121℃下滅菌(jun)30分鐘,待(dai)滅菌(jun)鍋內壓(ya)力為(wei)零時,取出(chu)滅菌(jun)物,放入(ru)事先(xian)消毒的接種(zhong)箱。打(da)開(kai)牛(niu)皮(pi)紙包封,一手(shou)持培(pei)養(yang)皿(min),一手(shou)持三角瓶,利用(yong)手(shou)指調(diao)控使培(pei)養(yang)皿(min)上(shang)蓋開(kai)啟約1~2厘米(mi),倒(dao)入(ru)培(pei)養(yang)基液體(ti)約10~20毫(hao)(hao)(hao)升,蓋嚴。將(jiang)培(pei)養(yang)皿(min)平(ping)(ping)置,冷卻后(hou)成一光滑平(ping)(ping)面,俗(su)稱平(ping)(ping)板(ban)(ban) 。平(ping)(ping)板(ban)(ban)冷卻至30℃以(yi)下時,接入(ru)待(dai)脫(tuo)(tuo)毒菌(jun)種(zhong)。接種(zhong)方法(fa):挑取米(mi)粒大小的一塊種(zhong)源,接入(ru)平(ping)(ping)板(ban)(ban)邊(bian)緣(yuan)。接種(zhong)后(hou)置于規(gui)(gui)(gui)定(ding)溫度(du)下培(pei)養(yang)〔視品種(zhong)調(diao)控溫度(du))。當菌(jun)絲萌發至最長為(wei)2厘米(mi)時,用(yong)尖(jian)刃(ren)接種(zhong)工具切(qie)取菌(jun)絲尖(jian)端1毫(hao)(hao)(hao)米(mi)左(zuo)右,接入(ru)新(xin)制平(ping)(ping)板(ban)(ban)上(shang)。此(ci)為(wei)1次脫(tuo)(tuo)毒。一般可連(lian)續脫(tuo)(tuo)毒3~4次。脫(tuo)(tuo)毒次數越多,脫(tuo)(tuo)毒效(xiao)果就(jiu)越有保(bao)證。
2.原基組(zu)織脫毒(du)技(ji)術
該技(ji)術最(zui)大(da)程(cheng)度革除了原有(you)組(zu)織分(fen)離(li)時(shi)(shi)子實(shi)體(ti)處于(yu)生(sheng)長中(zhong)后(hou)期,攜帶病毒、病菌(jun)(jun)可能性(xing)極大(da)等弊端(duan),真正(zheng)實(shi)現了分(fen)離(li)尖(jian)端(duan)組(zu)織的(de)脫毒目的(de)。具體(ti)操(cao)作(zuo)(zuo)(zuo)為: 常(chang)規(gui)配(pei)(pei)制基(ji)料(liao),調破氮比(bi)為30∶1。碳(tan)氮比(bi)不可小于(yu)25∶1,以(yi)免菌(jun)(jun)絲(si)過(guo)度旺(wang)盛生(sheng)長結成菌(jun)(jun)皮,不易現原基(ji)。大(da)口(kou)罐頭瓶(ping)(ping)(ping)洗(xi)凈、備用(yong)(yong)(yong)。準(zhun)(zhun)備數(shu)塊(kuai)又11厘米×11厘米的(de)純棉紗(sha)(sha)(sha)布(bu)。裝(zhuang)料(liao)至瓶(ping)(ping)(ping)口(kou)下1厘米時(shi)(shi),從(cong)瓶(ping)(ping)(ping)口(kou)處鋪上(shang)一(yi)層紗(sha)(sha)(sha)布(bu),用(yong)(yong)(yong)平口(kou)螺(luo)絲(si)刀(dao)(dao)將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)紗(sha)(sha)(sha)布(bu)邊(bian)緣(yuan)插(cha)至瓶(ping)(ping)(ping)下,使之緊貼瓶(ping)(ping)(ping)劈。封口(kou)滅菌(jun)(jun)、接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)、培(pei)養等操(cao)作(zuo)(zuo)(zuo)按常(chang)規(gui)進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)。待(dai)菌(jun)(jun)絲(si)發滿瓶(ping)(ping)(ping)后(hou),施行(xing)(xing)(xing)(xing)溫差、濕差、光照(zhao)等刺激,一(yi)般約7天即(ji)可現出(chu)原基(ji)。此(ci)時(shi)(shi)原基(ji)的(de)形態是白疙瘩 。待(dai)原基(ji)高至1厘米時(shi)(shi),即(ji)可進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)脫毒分(fen)離(li)。 將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)菌(jun)(jun)瓶(ping)(ping)(ping)用(yong)(yong)(yong)75%酒精擦洗(xi)后(hou),移入(ru)(ru)(ru)已(yi)消毒的(de)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)箱(xiang)(xiang),箱(xiang)(xiang)內不再進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)常(chang)規(gui)熏蒸。同(tong)時(shi)(shi)準(zhun)(zhun)備接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)針(或接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)釣)、多個刀(dao)(dao)片(以(yi)備交(jiao)替使用(yong)(yong)(yong)),與(yu)菌(jun)(jun)瓶(ping)(ping)(ping)一(yi)同(tong)放入(ru)(ru)(ru)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)箱(xiang)(xiang)中(zhong),噴灑新潔爾(er)滅以(yi)確保(bao)無(wu)菌(jun)(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)(zuo)。兩手用(yong)(yong)(yong)75%酒精擦洗(xi),伸入(ru)(ru)(ru)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)箱(xiang)(xiang),將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)刀(dao)(dao)片進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)灼燒滅菌(jun)(jun)后(hou)手持冷卻。打開菌(jun)(jun)瓶(ping)(ping)(ping)封口(kou),兩手配(pei)(pei)合用(yong)(yong)(yong)無(wu)菌(jun)(jun)鑷子取出(chu)原基(ji)。由于(yu)料(liao)面覆蓋一(yi)層紗(sha)(sha)(sha)布(bu),故不會將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)基(ji)料(liao)帶出(chu),操(cao)作(zuo)(zuo)(zuo)方(fang)便。用(yong)(yong)(yong)刀(dao)(dao)片將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)原基(ji)表層削去約1毫米,然后(hou)用(yong)(yong)(yong)尖(jian)刃刀(dao)(dao)片將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)原基(ji)劃切(qie)(qie),使每塊(kuai)大(da)小1毫米2左右。用(yong)(yong)(yong)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)(zhong)針將(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)分(fen)離(li)的(de)原基(ji)塊(kuai)移入(ru)(ru)(ru)平板或大(da)型試管(guan)進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)常(chang)規(gui)培(pei)養。操(cao)作(zuo)(zuo)(zuo)要點:一(yi)是用(yong)(yong)(yong)刀(dao)(dao)片進(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)削、切(qie)(qie)時(shi)(shi),每切(qie)(qie)一(yi)刀(dao)(dao)須更換一(yi)次刀(dao)(dao)片;二(er)是分(fen)離(li)塊(kuai)接(jie)(jie)(jie)入(ru)(ru)(ru)時(shi)(shi)須靠(kao)邊(bian)緣(yuan)投放,可接(jie)(jie)(jie)在平板的(de)邊(bian)緣(yuan)或試管(guan)的(de)最(zui)前(qian)部,一(yi)般不居中(zhong)接(jie)(jie)(jie)入(ru)(ru)(ru)。













